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分析食品中生物胺的荧光衍生

【来源/作者】北纳创联 【更新日期】2017-07-07

导读:反应结束后待其冷却至室温,加入 100 μL 2 mol / L 的 HCl 终止反应,然后漩涡振荡1 min,即得荧光衍生化样品。标准样品查询拨打:010-58103778

1 实验部分

1.1 仪器、试剂与材料

自组装加压毛细管电色谱系统,包括 TriSep⁃ 2010 型微流控制系统、±30 kV 高压电源;半导体泵浦式激光诱导荧光检测器( λex/ λem= 473 nm / 530nm,中国科学院大连化学物理研究所); Eclipse⁃荧光分光光度计(美国 Varian 公司); HB⁃031 金属恒温加热器 ( 上海申能博彩生物科技有限公司);Milli⁃Q 超纯水系统(美国 Millipore 公司)。

色胺(纯度 98%)、酪胺(纯度 99%) 购自美国Sigma 公司;组胺(纯度 97%)购自北京北纳创联生物技术研究院;精胺(纯度 97%)、亚精胺(纯度 99%)购自北京标准物质网。 NBD⁃F(纯度 99%) 购自日本东京化成工业株式会社;乙腈、甲醇为色谱纯;十水合硼酸钠( Na2B4O7 · 10H2O)、 硼酸(H3BO3 )、NaOH、盐酸为分析纯。

分别用乙腈(组胺、酪胺)和甲醇(色胺、精胺、亚精胺)配制质量浓度均为 1.0 g / L 的各生物胺标准储备液,于-20 ℃避光保存,使用时用流动相稀释至所需质量浓度。 用乙腈溶解并配制 10 mmol / L的 NBD⁃F 储备液,于-20 ℃ 避光保存,使用时用乙腈稀释至所需浓度。 所有缓冲液和样品溶液均经0.22 μm 微孔滤膜过滤及超声除气泡。

1.2 样品前处理

酱油和鸡肉肠样品购自福州大学城某大型超市。 在文献方法的基础上对样品前处理步骤进行改进。

酱油样品:量取 20 mL 酱油样品,置于 100 mL烧杯中,加入 50 mL 饱和氯化钠溶液,静置 5 min,用 1 mol / L NaOH 调节溶液 pH 至 11.0,用 20 mL乙酸乙酯萃取,取上清液,下层液体用同样方法重新萃取一次,合并上清液,用氮气吹干,残渣用 1 mL流动相溶解,0.22 μm 有机滤膜过滤后,用于荧光衍生和 CEC 分析。

鸡肉肠样品:称取 5 g 鸡肉肠样品,切丁并制成肉糜,用 15 mL 0。05 mmol / L 的三氯乙酸超声提取25 min,共 2 次,然后以 3 000 r/ min 离心 5 min,取上清液,残余物用 15 mL 甲醇超声25 min,共 2 次,然后以 3 000 r/ min 离心 10 min,合并上清液。取4mL上清液用氮气流吹干,残余物用2 mL 0。05mmol / L 的三氯乙酸溶解,0。22 μm 滤膜过滤,滤液经衍生后进行 CEC 分析。

1.3 生物胺的荧光衍生

分别取 30 μL 5 种生物胺的标准储备液( 10mg / L)或 150 μL 前处理后的样品溶液,加入 400 μL 硼酸缓冲液(50 mmol / L, pH 8.0)、300 μL 含 1mmol / L NBD⁃F 的乙腈溶液,振荡混匀,于 75 ℃ 避光衍生化 25 min。 反应结束后待其冷却至室温,加入 100 μL 2 mol / L 的 HCl 终止反应,然后漩涡振荡1 min,即得荧光衍生化样品。 另取 550 μL 硼酸缓冲液(50 mmol / L, pH 8.0),加入 300 μL 含 1 mmol / LNBD⁃F 的乙腈溶液,在相同条件下进行衍生化,作为试剂空白。 衍生化样品用流动相稀释至所需浓度,用于 CEC 分析。

1.4 色谱条件

色谱柱:C18 毛细管电色谱填充柱(75 μm i.d.,375 μm o.d.,总长 50 cm,有效长度 20 cm,填充 3 μm ODS,苏州环球色谱责任有限公司);等度洗脱;流动相:乙腈⁃乙酸铵缓冲液(20 mmol / L, pH 8.0)(75 ∶25, v / v);流速:0.03 mL / min;分离电压: -8kV;辅助压力:6.9 MPa (1 000 psi)。

来源:色谱《毛细管电色谱⁃激光诱导荧光检测法分析食品中的生物胺》

张冰宇1,2, 蔡晓蓉1,2, 尹艳艳1,2, 李茜诺1,2, 吕海霞3, 吴晓苹1,2∗

(1. 食品安全分析与检测教育部重点实验室(福州大学), 福建 福州 350108; 2. 福州大学化学学院,福建 福州 350108; 3. 福州大学材料科学与工程学院, 福建 福州 350108)

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【关键词】色胺 乙腈 氯化钠 色谱柱 北京标准物质网 

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